Плазмотерапия PRP (Platelet Rich Plasma) – плазма, богатая тромбоцитами

PRP – это клеточная биотехнология, входящая в сферу регенеративной медицины, основанная на стимуляции пролиферативной активности клеток предшественников факторами роста тромбоцитов.

Факторы роста – это специфические протеины, расположенные в альфа-гранулах тромбоцитов.

Точное понимание сути и тонкостей этой технологии определяет степень терапевтического или ревитализирующего эффекта.

Прежде чем углубиться в данную тему, хотелось бы акцентировать ваше внимание на медицинских технологиях, использующих пробирки с разделительным гелем («Плазмолифтинг» и др.) как наиболее известной в медицинских (и не только) кругах. Как выяснилось, многие врачи считают, что получают с помощью этих пробирок PRP, однако, на самом деле, это почти чистая плазма, большая часть тромбоцитов застревает в разделительном геле, таким образом, это PPP – бедная тромбоцитами плазма!

Пробирки с разделительным гелем:

это НЕ PRP (НЕ БОГАТАЯ тромбоцитами плазма),
это PРP (Platelet Poor Plasma) – БЕДНАЯ тромбоцитами плазма с содержанием тромбоцитов меньше, чем в цельной крови.

Эффективность PRP:

Эффективность инъекционной формы PRP определяется двумя условиями:

оптимальной концентрацией тромбоцитов,
жизнеспособностью тромбоцитов и факторов роста.

Чтобы получить оптимальную концентрацию жизнеспособных тромбоцитов и факторов роста, нужен инструмент – технология, позволяющая это сделать.

Сегодня в мире предлагается большое количество методик, дающих возможность (по мнению их авторов) получить плазму, богатую тромбоцитами. Порой разница между ними концептуальная, но чаще определяется нюансами, позволяющими одним получать PRP с хорошим терапевтическим эффектом, а другим – нет. До сих пор все качественные технологии стоили очень дорого, но благодаря отечественной разработке CORTEXIL PRP, данная процедура стала доступной практически для всех.

Оптимальная концентрация тромбоцитов – первое условие эффективности PRP!

«Haynesworth (Хейнсворт) с соавторами убедительно доказали, что пролиферация мезенхимальных стволовых клеток взрослого организма и их дифференцировка непосредственно связаны с концентрацией тромбоцитов (факторов роста). Они показали кривую доза-ответ, что свидетельствует о дозозависимости клеточной реакции мезенхимальных стволовых клеток. 4-5 кратное увеличение концентрации тромбоцитов в PRP по сравнению с базовым значением вызывает максимальную положительную реакцию мезенхимальных стволовых клеток».

Stephen E. с соавторами в работе: «CHEMOTACTIC AND MITOGENIC STIMULATION OF HUMAN MESENCHYMAL STEM CELLS BY PLATELET RICH PLASMA SUGGESTS A MECHANISM FOR ENHANCEMENT OF BONE REPAIR» доказали, что PRP выступает в качестве мощного аттрактанта для стволовых клеток. Количество мезенхимальных стволовых клеток в местах инъекций PRP увеличивается на 227% (см. Таблицу № 1).

Таблица № 1.

Важность этих знаний заключается в том, что далеко не все технологии PRP позволяют достичь такого терапевтического уровня концентрации тромбоцитов. PRP – дозозависимая процедура.

1 миллион тромбоцитов в мкл – это эталон для терапевтически эффективной PRP. Получение BUFFY COAT с последующим разведением его плазмой крови до желаемой концентрации тромбоцитов.

Концентрацию тромбоцитов около 1 000 000 в микролитре плазмы можно получить только применяя технологию, позволяющую сформировать и забрать «BUFFY COAT» – лейкоцитарно-тромбоцитарный концентрат. Не все методики позволяют это сделать.

Жизнеспособность тромбоцитов и факторов роста – второе условие эффективности PRP!

Важнейшие звенья, определяющие жизнеспособность тромбоцитов и факторов роста:

Правильный выбор антикоагулянта

Правильный выбор антикоагулянта является важнейшим (самым важным) условием получения терапевтически эффективной PRP.

Антикоагулянт, используемый при производстве PRP должен не только блокировать свертываемость крови, то есть переход фибриногена в фибрин, но и препятствовать преждевременной активации тромбоцитов. Такими антикоагулянтами являются только антикоагулянты на основе цитрата натрия.

Что мы подразумеваем под активацией тромбоцитов?

Изменение агрегатного состояния тромбоцита с последующей дегрануляцией и выделением факторов роста.

Необходимо помнить, что период полураспада, т.е. время жизни факторов роста после дегрануляции (активации) тромбоцитов составляет всего около 2-х минут.

За первые 10 минут после активации тромбоциты секретируют около 70% факторов роста. Преждевременная, т.е. in vitro, активация тромбоцитов приведет к значительной количественной потере факторов роста!

Чем обусловлена активация тромбоцитов?

Активация начинается с момента потери контакта тромбоцитов с эндотелием кровеносного сосуда и любого механического напряжения.

Наиболее сильными биологическими активаторами тромбоцитов считаются коллаген (главный белок внеклеточного матрикса), тромбин (основной белок плазменной системы свертывания), АДФ (аденозиндифосфат, появляющийся из разрушенных клеток сосуда или секретируемый самими тромбоцитами) и тромбоксан А2 (вторичный активатор, синтезируемый тромбоцитами).

Для активации и изменения агрегатного состояния тромбоцита необходим эндогенный и, в большей степени, экзогенный кальций (Ca++).

Следовательно, единственным антикоагулянтом, пригодным для получения инъекционной формы PRP является антикоагулянт на основе цитрата натрия. Кроме того, антикоагулянт должен содержать глюкозу для поддержания высокого метаболизма тромбоцитов и сохранения их жизнеспособности.

Антикоагулянты:

Цитрат натрия связывает экзогенный кальций крови, необходимый для изменения агрегатного состояния и активации тромбоцитов, тем самым лишает тромбоциты возможности преждевременной (in vitro) активации и дегрануляции (блокирует активацию тромбоцитов). При производстве PRP во всем мире применяют антикоагулянты на основе цитрата натрия.
Гепарин – его действие на кровь заключается в стимулировании антитромбина-3, что тормозит образование тромбина и переход фибриногена в фибрин, т.е. предупреждает образование фибринового сгустка (блокирует коагуляциионный гемостаз). Гепарин не оказывает никакого влияния на предупреждение преждевременной активации и дегрануляции тромбоцитов. При использовании гепарина активация и дегрануляция тромбоцитов с выходом факторов роста начинается уже в момент забора крови и центрифугирования. Учитывая тот факт, что период полураспада (время жизни) факторов роста с момента активации тромбоцитов составляет всего 2 минуты, то большая часть факторов роста попадает в ткани в нежизнеспособном состоянии.

Центрифугирование

Для производства терапевтически эффективной PRP должна использоваться только центрифуга с подвесным бакет-ротором. В роторах с подвесными стаканами пробирки устанавливаются вертикально. Под действием возникающей центробежной силы пробирки переходят в горизонтальное положение с углом наклона к оси вращения в 90°. В центрифугах с угловым ротором пробирки установлены под фиксированным углом 30-40°, следовательно, при центрифугировании возникают конвекционные потоки, которые в значительной степени затрудняют разделение клеток крови. Конвекция является результатом того, что под действием центробежных сил частицы оседают под углом в 90°, т.е. строго перпендикулярно оси вращения центрифуги, а не 30-40°, как установлены пробирки и поэтому ударяются о стенки пробирки и соскальзывают на дно, что делает практически невозможным получение BUFFY COAT!

В 2005 году группа ученых из Сан-Франциско (UOP Arthur A. Dugoni School of Dentistry, San Francisco, CA.) пришла к выводу, что концентрация жизнеспособных тромбоцитов и факторов роста обратно пропорциональна центробежному ускорению (ОЦУ).

Для производства терапевтически эффективной PRP должен применяться режим центрифугирования, не превышающий 700g. Режим центрифугирования, при котором относительное центробежное ускорение (ОЦУ) превышает 700g, приводит к разрушению и усилению преждевременной механической дегрануляции тромбоцитов. Чтобы этого не происходило, ОЦУ не должно превышать 700g.

Балансировка центрифуги

Плохая балансировка центрифуги приводит к повышенной вибрации и разрушению тромбоцитов, что вызывает преждевременную механическую активацию тромбоцитов.

Вакуумный забор крови

При вакуумном способе забора венозной крови практически невозможно контролировать скорость потока забираемой крови. При существующих вакуумных системах стартовая турбулентность потока забираемой крови приводит к преждевременной механической активации тромбоцитов уже в процессе забора крови.

Нужно ли активировать тромбоциты IN VITRO

Некоторые методики производства PRP предусматривают активацию in vitro инъекционных форм PRP аутологичным тромбином или кальцием.

При производстве инъекционных форм PRP необходимо помнить, что период полураспада, т.е. время жизни факторов роста после дегрануляции (активации) тромбоцитов всего около 2 минут!

В первые 10 минут после активации тромбоциты выделяют около 70% факторов роста. Преждевременная активация тромбоцитов приведет к серьезной количественной потере факторов роста!

Во время инъекций PRP мы создаем в местах инъекций микрогематомы, следовательно, введенная нами PRP смешивается с кровью богатой Ca++ (необходимым для активации тромбоцитов), в которой запускается коагуляционный гемостаз с образованием тромбина – мощного активатора тромбоцитов.

PRP должна быть активирована непосредственно в тканях и ни в коем случае заранее!

Цены

Процедура	Стоимость
Плазмотерапия PRP
1 сустав	3 000 руб.